НОВЫЕ ТЕХНОЛОГИИ, МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ, ЛЕЧЕНИЯ, ПРОФИЛАКТИКИ



страница10/34
Дата21.05.2016
Размер5.84 Mb.
1   ...   6   7   8   9   10   11   12   13   ...   34

5 НОВЫЕ ТЕХНОЛОГИИ, МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ, ЛЕЧЕНИЯ, ПРОФИЛАКТИКИ

1213 Гонтарь+


УДК 616.72-002.77-08+616.5-004.1-08+616.5-002.252.2-08

© И.П. Гонтарь, Н.В. Ненашева, Н.А. Матасова, Э.Р. Аветисова,

Л.И. Кочнева, И.А. Зборовская, 2010
Клинико-диагностическое значение определения антител к эластину и эластазе у больных ревматоидным артритом, системной красной волчанкой, системной склеродермией

И.П. Гонтарь, Н.В. Ненашева, Н.А. Матасова, Э.Р. Аветисова,

Л.И. Кочнева, И.А. Зборовская

Научно-исследовательский институт клинической и экспериментальной ревматологии РАМН, г.Волгоград, Россия
Гонтарь И.П., Ненашева Н.В., Матасова Н.А., Аветисова Э.Р., Кочнева Л.И., Зборовская И.А. Клинико-диагностическое значение определения антител к эластину и эластазе у больных ревматоидным артритом, системной красной волчанкой, системной склеродермией // Профилактическая и клиническая медицина. – 2010. - № 2 (35). – С.

Государственное учреждение «Научно-исследовательский институт клинической и эксперементальной ревматологии» Российской академии медицинских наук. Россия, 400138, г. Волгоград, ул. Землячки, д. 76, тел.: 8(8442) 35-56-48, факс: 8(8442) 93-42-11.

Резюме: В статье представлены результаты исследования зависимости между образованием аутоантител к компонентам соединительной ткани - эластину и эластазе, - и особенностями течения ревматических заболеваний.

Ключевые слова: ревматоидный артрит; системная красная волчанка; склеродермия; антитела к эластину и эластазе; дианостическое значение.


Уровень аутоантител к эластазе и эластину определяется состоянием здоровья. Так, на ограниченном количестве больных без всестороннего клинического анализа было установлено повышение содержания антител к эластину у больных системной красной волчанкой (СКВ) [5], системной склеродермией (ССД) [2], ревматоидным артритом (РА) [3], а также к эластазе - только у больных СКВ [4].

Цель исследования. Изучение корреляции между уровнями антител (АТ) к эластину и эластазе и особенностями течения заболевания в сыворотке крови больных РА, СКВ, ССД.

Задачи:

1. Получить иммобилизированную форму антигена с магнитными свойствами на основе эластина и эластазы.



2. Отработать условия и технику постановки иммуноферментного анализа с использованием иммобилизированных антигенных форм.

3. Исследовать зависимость уровня специфических антител к эластазе и эластину от активности заболевания, поражений внутренних органов у больных РА, СКВ и ССД.

Материал и методы исследования. Под наблюдением находились 30 практически здоровых лиц - доноров станции переливания крови МУЗ ГКБ №25 в возрасте от 26 до 60 лет (18 женщин и 12 мужчин); 106 больных с достоверным диагнозом РА, поставленным на основании критериев Американской коллегии ревматологов (ACR) (1987); 35 больных с достоверным диагнозом СКВ, поставленным на основании критериев АРА (1982), рабочей классификации клинических вариантов течения СКВ (Насонова В.А., 1972-1986), классификаций SLAM, SLEDAI, SLICC-ACR; 28 больных с достоверным диагнозом ССД, поставленным на основании критериев АРА (1980) и отечественной классификации болезни (Гусева Н.Г., 1975, с доп. 1993).

Среди больных РА было 85 (80,2%) женщин и 21 (19,8%) мужчина. I степень (минимальная) активности ревматоидного процесса определена у 10 (9,4%), II (умеренная) - у 68 (64,2%) и Ш (максимальная) – у 32 (26,4%) больных. Клинико-инструментальное, иммунологическое и биохимическое обследование больных позволило выявить у 48 (45,3%) больных РА системные проявления заболевания. Наиболее часто отмечалось поражение ЦНС (церебральный васкулит) – у 30 (62,5%), анемия – у 15 (14,2%).

Среди обследованных больных СКВ было 5 мужчин (14,3%) и 30 (85,7%) женщин в возрасте от 19 до 55 лет. При этом у 11,4% (4 человека) была диагностирована первая степень активности патологического процесса, у 68,6% больных (24 человека) – вторая, у 20% (7 человек) – третья.

Среди больных ССД было 25 (89,3%) женщин и 3 (10,7%) мужчины. I степень активности установлена у 3 (10,7%), II – у 21 (75%), III – у 4 (14,7%) больных.

АТ к эластину и эластазе определяли в сыворотке крови больных методом непрямого иммуноферментного анализа (ELISA-тест) с использованием иммобилизированных магнитосорбентов (МС) [1]. В качестве антигенов использовали коммерческие препараты компании «SIGMA-ALDRICH» (США): эластаза панкреатическая из поджелудочной железы свиньи с активностью 4 Ед/мл и эластин из легких человека. Результаты иммуноферментного определения АТ к эластазе и эластину выражали в единицах оптической плотности (е.о.п.). Положительными считались результаты, превышающие на два стандартных отклонения показатели, полученные при обследовании здоровых лиц. Статистическая обработка результатов проводилась с использованием программных пакетов «STATISTICA 6.0», «EXCEL 5.0», «SPSS 10.0».

Результаты исследования и их обсуждение. Средние величины оптической плотности при определении АТ к эластазе у доноров составила 0,095 е.о.п., к эластину – 0,130 е.о.п.. Верхние границы этих значений равны соответственно 0,112 е.о.п. и 0,180 е.о.п. В дальнейшем все величины оптической плотности, превосходящие верхнее значение, считались повышенными.

Изменение уровня антител к эластазе наблюдалось у 59 (55,7%), а к эластину - у 25 (23,6%) больных РА (табл. 1).

Таблица 1

Содержание АТ к эластазе и эластину в сыворотке крови здоровых лиц и больных РА в зависимости от активности процесса



Контингент

Число наблюдений

Статистические показатели

АТ к эластазе, е.о.п.

АТ к эластину, е.о.п.

Здоровые

30

М± m

σ


0,095±0,002

0,009


0,130±0,005

0,025


Больные с I степенью активности

10

М± m

σ


0,120±0,007**

0,022


0,200±0,01**

0,031


Больные со II степенью активности

68

М± m

σ


0,232±0,004*

0,030


0,258±0,003*

0,027


Больные с III степенью активности

32

М± m

σ


0,361±0,003*

0,018


0,297±0,003**

0,019


Примечание. * р<0,01; ** р<0,05.
В группе больных с I активностью РА отмечалась тенденция к увеличению уровня АТ к эластазе и эластину по сравнению со здоровыми лицами. У больных со II и Ш степенью активности РА наблюдалось дальнейшее увеличение содержания АТ к эластазе и эластину по сравнению с минимальной активностью заболевания.

У больных РА с системными проявлениями отмечалось увеличение содержания антител к эластазе и эластину, а у больных с суставной формой заболевания выявлялось умеренное увеличение уровня АТ как к эластазе, так и к эластину (табл. 2).



Таблица 2

Уровень АТ к эластазе и эластину у больных РА в зависимости от формы заболевания



Контингент

Число наблюдений

Статистические показатели

АТ к эластазе, е.о.п.

АТ к эластину, е.о.п.

Здоровые

30

М± m

σ


0,095±0,002

0,009


0,130±0,005

0,025


Больные с суставно-висцеральной формой заболевания

48

М± m

σ


0,251±0,003*

0,018



0,242±0,002*

0,015



Больные с суставной формой заболевания

58

М± m

σ


0,382±0,003**

0,021



0,353±0,002**

0,017



Примечание. * р<0,01; ** р<0,05.
Среди больных РА с повышенными значениями АТ к эластазе (59 человек) 28 пациентов (47,5%) страдали суставной формой заболевания, а 31 (52,5%) имели и внесуставные проявления недуга. Структура висцеральных поражений выглядит следующим образом: у 16 (51,6%) больных наблюдалась анемия различной степени тяжести, у 13 (41,9%) – поражение центральной нервной системы по типу церебрального васкулита, у 5 (16,1%) – поражение сердца, у 4 (12,9%) – сосудистая патология, у 3 (9,7%) – поражение почек и у 2 (6,5%) больных выявлено поражение ретикулоэндотелиальной системы. Патологию сосудов можно объяснить содержанием в сосудистой стенке эластина, на который и образуются аутоантитела. Прямых указаний на наличие эластазы в эритроцитах нами в литературе обнаружено не было, однако, учитывая, что тромбоциты и лейкоциты, содержащие этот фермент, и эритроциты происходят от общей клетки-предшественника миелопоэза, нельзя исключить нахождение эластазы и в этих клетках крови.

Повышение уровня антител к эластазе наблюдалось у 28 (80%), а повышение уровня антител к эластину - у 12 (42,9%) больных СКВ. В результате проведенной работы выявлено изолированное и сочетанное увеличение содержания АТ у больных СКВ I и II степени активности процесса, в группе больных с III степенью активности (7 человек) повышения уровня АТ к изучаемым антигенам не наблюдалось (табл. 3).



Таблица 3

Уровень АТ к эластазе и эластину у больных СКВ в зависимости от активности патологического процесса



Контингент

Число наблюдений

Статистические показатели

АТ к эластазе, е.о.п.

АТ к эластину, е.о.п.

Здоровые

30

М± m

σ


0,095±0,002

0,009


0,130±0,005

0,025


Больные с I степенью активности

4

М± m

σ


0,131±0,007*

0,014


0,198±0,007**

0,013


Больные с II степенью активности

24

М± m

σ


0,119±0,002*

0,012


0,189±0,002**

0,010


Больные с III степенью активности

7

М± m

σ


0,096±0,002*

0,004


0,132±0,005**

0,014


Примечание. * р<0,01; ** р<0,05.
Отсутствие увеличения содержания АТ у больных с Ш степенью активности можно объяснить тем, что у наблюдаемых нами больных с максимальной активностью заболевания отсутствует поражение суставов (у 3 из 7 наблюдаются лишь артралгии), а в суставной ткани эластин представлен в большем объеме, чем в коже, которая чаще всего и повреждается при СКВ.

В группе больных с повышенным уровнем АТ к эластазе (28 человек) 26 (92,9%) больных имели поражения кожи, 24 (85,7%) – суставов, 19 (67,9%) – центральной нервной системы, 13 (46,4%) – сердца, 11 (39,3%) – почек, 9 (32,1%) – мышц, 6 (21,4%) – легких, по 4 (14,3%) – поражение сосудов и ретикулоэндотелиальной системы.

Среди больных ССД (группа в целом) повышение уровня антител к эластазе наблюдалось у 22 (78,6%) человек, к эластину - у 10 (35,7%), сочетанное пвышение уровня АТ к эластазе и эластину выявлено у 8 (28,6%) больных (табл. 4).

Таблица 4

Уровень АТ к эластазе и эластину у больных ССД в зависимости от активности



Контингент

Число наблюдений

Статистические показатели

АТ к эластазе, е.о.п.

АТ к эластину, е.о.п.

Здоровые

30

М± m

σ


0,095±0,002

0,009


0,130±0,005

0,025


Больные с I степенью активности

3

М± m

σ


0,121±0,003**

0,006


0,139±0,007*

0,012


Больные со II степенью активности

21

М± m

σ


0,120±0,002**

0,010



0,128±0,002*

0,008



Больные с III степенью активности

4

М± m

σ


0,130±0,002**

0,004



0,141±0,003*

0,006



Примечание. *р<0,01; ** р<0,05.
При ССД с I степенью активности (3 больных), по сравнению со здоровыми, отмечается увеличение уровня антител к эластазе – у 2 (66,7%) больных, к эластину – у 1 (33,3%) больного, при средней степени активности (21 человек) соответственно - у 19 (90,5%) и у 9 (42,9%) больных. III степень активности ССД ассоциируется с увеличением в сыворотке крови больных АТ и к эластазе, и к эластину.

Из 22 человек с повышенным уровнем антител к эластазе 21 (95,5%) больной имел поражение кожи, по 18 пациентов (81,8%) – сосудов и суставов, 15 (68,2%) – легких, по 12 (54,5%) – центральной нервной системы и сердца, 10 (45,5%) – мышц, у 7 человек (31,8%) наблюдалось поражение желудочно-кишечного тракта. При этом стоит отметить, что в группе больных с высоким содержанием АТ к эластазе (22 человек) выявлено более частое поражение легких (у 15 больных – 68,2%), чем в группе с низкими цифрами АТ к эластазе (из 6 человек 2 человека – 33,3%).

И при ССД, и при СКВ среди больных с повышенным уровнем АТ к эластазе и эластину в структуре клинических проявлений преобладает поражение кожи. Второе место у пациентов с СКВ занимает суставной синдром, третье – васкулопатии. У больных с ССД, напротив, чаще выявляется сосудистая патология, а затем - поражение суставов. При ССД представляется важной связь повышенного уровня АТ к эластазе и эластину с поражением легких. Можно предположить, что АТ к эластазе, снижая активность фермента, могут участвовать в патологическом обмене эластина, вызывая повреждение органов дыхания.

Выводы


1. Получены иммобилизированные формы эластазы и эластина, отработаны условия и техника постановки иммуноферментного анализа, изучена зависимость уровня АТ к эластазе и эластину от активности заболевания и повреждения внутренних органов у больных РА, СКВ, ССД.

2. Чаще всего у больных РА, СКВ и ССД определены: изолированное повышение содержания АТ к эластазе, немного реже - сочетанное увеличение уровня АТ и к эластазе, и к эластину, совсем единичные случаи превышения нормальных величин АТ к эластину. Возможно, это связано с тем, что аутоиммунный процесс в одном из звеньев обмена эластина начинается с образования аутоантител к эластазе. Эти аутоантитела, снижая активность эластазы, препятствуют нормальному обмену эластина, который приобретает свойства аутоантигена, провоцируя синтез АТ к нему.

3. Исследование уровня данных АТ в сыворотке крови больных РА, СКВ и ССД иммуноферментным методом с использованием иммобилизированной формы магнитоуправляемого сорбента позволит улучшить диагностику этих ревматических заболеваний, а также углубить знания о патогенезе ряда ревматических заболеваний.

Список литературы

1. Гонтарь И.П. Иммобилизированные гранулированные антигенные препараты с магнитными свойствами в диагностике и лечении ревматоидного артрита, системной красной волчанки и системной склеродермии (клинико-экспериментальное исследование) // Автореф. дисс….док.м.н. – Волгоград. – 2006. – 34 с.

2Colburn K.K. Serum anti-tropo:anti-elastin antibody ratio assessing elastin tumover in scleroderma / K.K. Colburn, G.T. Kelly, M.C. Malto // Clin Rheumatol. – 1992. - Vol. 11. - № 2. – Р. 206-210.

3. Colburn K.K. Abnormalities of serum antielastin antibodies in connective tissue diseases / K.K. Colburn, E. Langga-Shariffi, G.T. Kelly // J Investig Med. – 2003. - Vol. 51. - № 2. – Р. 104-109.

4. Dunphy J. Antineutrophil cytoplasmic antibodies and HLA class II alleles in minocycline-induced lupus-like syndrome / J. Dunphy, M. Oliver, A.L. Rands // Br. J. Dermatol. – 2000. - Vol. 142. - № 3. – Р. 461-467.

5. Gminski J. Anti-elastin antibodies in systemic lupus erythematosus / J. Gminski, W. Poborski, A. Kasprzak // Pol Tyg Lek. – 1990. - Vol. 45. - № 25-26. – Р. 513-515.

Сведения об авторах:

Материал поступил в редакцию 12.10.2009 г.





Поделитесь с Вашими друзьями:
1   ...   6   7   8   9   10   11   12   13   ...   34


База данных защищена авторским правом ©dogmon.org 2017
обратиться к администрации

    Главная страница