Министерство здравоохранения и социального развития



страница12/34
Дата21.05.2016
Размер5.84 Mb.
1   ...   8   9   10   11   12   13   14   15   ...   34

1341 Нилова+


УДК: 616.34-008.87-07:579.864

© Л.Ю. Нилова, Е.А. Оришак, А.Г. Бойцов, 2010



Адгезивная активность лактобактерий как тест для индивидуального подбора пробиотиков при коррекции дисбактериоза

Л.Ю. Нилова, Е.А. Оришак, А.Г. Бойцов

Санкт–Петербургская государственная медицинская академия им. И.И. Мечникова, Санкт-Петербург, Россия
Нилова Л.Ю., Оришак Е.А., Бойцов А.Г. Адгезивная активность лактобактерий как тест для индивидульного подбора пробиотиков при коррекции дисбактериоза // Профилактическая и клиническая медицина. – 2010. - № 2 (35). – С.

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Санкт-Петербургская государственная медицинская академия им. И.И. Мечникова Министерства здравоохранения Российской Федерации» (ГОУВПО СПбГМА им. И.И. Мечникова Росздрава). Россия, 195067, Санкт-Петербург, Пискаревский пр., д. 47. Teл.: 8(812)543-96-09, факс: 8(812)740-15-24, тел./факс: 8(812)543-01-26. Эл. адрес: mechnik@gmail.com

Резюме: Целью исследования явилась разработка методики для индивидуального подбора лактосодержащего пробиотика для коррекции дисбактериоза кишечника. Задачи исследования - изучение адгезивных свойств различных пробиотических препаратов, сравнение их адгезивной активности по отношению к разным видам эпителия одного и того же пациента.

Материал и методы исследования. Для адгезии использовали эпителиальные клетки кишечного и буккального эпителия. Результат выражали в виде среднеарифметического числа бактерий, прикрепившихся на одной эпителиальной клетке. Интенсивность адгезивной активности оценивали в баллах: – от 1 до 5.

Результаты исследования свидетельствуют о возможности использования оценки степени адгезии пробиотических штаммов лактобактерий к клеткам буккального эпителия для представления об их адгезивной способности к кишечному эпителию конкретного пациента. Степень адгезивности зависит от соответствия рецепторов лактобактерий рецепторам эпителиальных клеток пациента, поэтому подбор пробиотиков должен учитывать экспериментальные характеристики данного препарата применительно к конкретному пациенту.

Ключевые слова: дисбактериоз; пробиотики; адгезия; адгезивность пробиотических штаммов; лактобактерии.


Положение о том, что молочнокислые бактерии полезны благодаря своей способности вытеснять патогенные микроорганизмы на слизистых оболочках, было выдвинуто ещё И.И. Мечниковым. И поныне именно способность лактобактерий прикрепляться к клеткам слизистых традиционно изучают на этапе поиска перспективных штаммов для создания пробиотиков, так как способность к адгезии рассматривают в качестве одного из механизмов колонизации кишечного биотопа [2, 3, 7]. Способность к адгезии – это свойство вида, но интенсивность адгезии – признак, зависящий от множества факторов и, прежде всего, от первоначального местоположения конкретного штамма. Например, для лактобацилл, выделенных от человека, характерна большая адгезивность, чем для штаммов, применяемых при изготовлении лечебно-профилактических кисломолочных продуктов. В литературе отмечается низкая адгезивность ряда пробиотических штаммов к клеткам слизистой кишечника [4]. Очевидно, что основой микробиоценоза является микрофлора матери, к которой в процессе внутриутробного развития у плода формируется иммунологическая толерантность, в отличие от микрофлоры, вводимой искусственно с намерением скорректировать микробиоценоз. Индигенная микрофлора чаще всего поддерживается в стабильном видовом спектре в течение жизни или возвращается к исходной картине, если устранение причины дисбиоза возможно [5, 6]. Однако предполагается, что приживление лактобацилл к чужеродному эпителию возможно и зависит она от соответствия рецепторов данного штамма лактобацилл рецепторам эпителиальных клеток [1]. Таким образом, встает вопрос об индивидуальном тестировании пробиотических штаммов на адгезивную активность по отношению к эпителию пациента.

Цель исследования. Разработка методики для индивидуального подбора лактосодержащего пробиотика для коррекции дисбактериоза кишечника.

Задачи исследования: изучение адгезивных свойств различных пробиотических препаратов, сравнение адгезивной активности к разным видам эпителия одного и того же пациента.

Материал и методы исследования. Адгезивную активность пробиотиков изучали с использованием 5 препаратов, содержащих лактобактерии. Штаммы лактобактерий получали путем посева коммерческих препаратов и выделения чистых культур на плотных средах в анаэробных условиях. Для адгезии использовали эпителиальные клетки кишечного и буккального эпителия 112 пациентов. Кишечный эпителий забирали с помощью пластикового ректального зонда, буккальный эпителий – с помощью деревянного шпателя. Полученные клетки кишечного и буккального эпителия доставляли в лабораторию в фосфатно-солевом буфере. Клетки отмывали путем трехкратного центрифугирования (1000 об/мин – 5 мин). Из осадка готовили контрольные мазки. Образец считали пригодным для исследования, если при микроскопии в каждом поле зрения было не менее 2 – 3 эпителиальных клеток. Для изучения адгезивной активности в центрифужную пробирку вносили 800 мкл суспензии эпителиальных клеток и 600 мкл суспензии лактобактерий в концентрации 109 кл./мл. Содержимое пробирок инкубировали 2 часа при 37оС с периодическим перемешиванием. После инкубации неадсорбированные лактобактерии удаляли путем двухкратного отмывания центрифугированием (1000 об/мин – 3 мин). Осадок микроскопировали и подсчитывали количество прикрепившихся лактобактерий. Результат выражали в виде среднеарифметического числа бактерий, прикрепившихся на одной эпителиальной клетке. Интенсивность адгезивной активности выражали в баллах: до 30 адгезированных бактериальных клеток – 1 балл, от 31 до 60 – 2 балла, от 61 до 90 – 3 балла, от 91 до 120 – 4 балла, более 121 – 5 баллов.

Результаты исследования и их обсуждение. При проведении параллельного исследования с буккальным и кишечным эпителием, полученным от 11 пациентов, показано, что степень прикрепления к разным видам эпителия одного пациента была сопоставима. Сопоставление различий в результатах, полученных с использованием буккального и кишечного эпителия, проводили с помощью двухвыборочного F–теста для дисперсии для каждого препарата и каждого пациента отдельно, учитывая количество адгезированных микроорганизмов на каждой из клеток одного вида эпителия. F-критерий составил от 0,004 до 6,205 при критическом F=7,71; α=0,05 (dF=5, критерий односторонний). В 94,4% случаях была доказана недостоверность различий между двумя видами эпителия, полученными от одного и того же пациента. Для определения силы взаимосвязи между количеством адгезированных пробиотических микроорганизмов на буккальном и кишечном эпителиях результаты обрабатывали методами корреляционного анализа - расчет коэффициентов корреляции Пирсона (r) и Спирмена (ρ). Была выявлена прямая сильная связь интенсивности адгезии лактобактерий к двум видам эпителия одного и того же пациента (9 пациентов по 5 препаратов). Достоверность подтверждена с помощью средней ошибки. Коэффициент линейной корреляции (r) колебался от 0,7 до 1, коэффициент ранговой корреляции Спирмена – от 0,6 до 1 (P>0,05). Полученные результаты свидетельствуют о возможности использования оценки степени адгезии пробиотических штаммов лактобактерий к клеткам буккального эпителия для представления об их адгезивной способности к кишечному эпителию конкретного пациента.

Затем сравнивали интенсивность адгезии одного и того же пробиотического штамма лактобактерий к буккальному эпителию разных пациентов для оценки значимости этого критерия адгезивности для успешного подбора пробиотического препарата для конкретного пациента. Адгезивность экзогенных лактобактерий составляла от 1 до 5 баллов. При этом ни один из испытанных пробиотических штаммов не обладал универсально высокой адгезивностью. Штамм, адгезивность которого к эпителию одного пациента составляла 5 баллов, к эпителию других прикреплялся с интенсивностью 1-2 балла (рис. 1).



Рис. 1. Сравнение адгезивной активности пробиотических лактобактерий к эпителию разных пациентов


Это позволяет утверждать, что подбор пробиотиков должен проводиться тщательно и учитывать экспериментальные характеристики данного препарата применительно к конкретному пациенту. Для оценки значимости разницы степени адгезии разных пробиотических препаратов к эпителию конкретного больного использовали однофакторный дисперсионный анализ. Различия в адгезивной активности разных биопрепаратов на один вид эпителия оказались не случайны и статистически подтверждены (F-критерий составил от 3,5 до 45; F критический - 3,48; α=0,05; dF=5; критерий односторонний). Таким образом, независимо от типа препарата, степень его адгезии зависит не столько от типа эпителия, сколько от соответствия рецепторам эпителия конкретного пациента.

Заключение. Из представленных данных следует, что степень адгезивности зависит от соответствия рецепторов лактобактерий рецепторам эпителиальных клеток пациента, поэтому интенсивность адгезии может использоваться как тест для индивидуального выбора пробиотических препаратов лактобактерий.

Список литературы

1. Адгезия лактобактерий к клеткам вагинального и буккального эпителия / А.Г. Бойцов, С.В. Рищук, Ю.Ю. Ильясов, Т.А. Гречанинова // Вестник СПбГМА им. И.И. Мечникова. - 2004. - № 4(5). - С. 191-193.

2. Адгезивные и гемагглютинирующие свойства лактобацилл / В.И. Брилис, Т.А. Брилене, Х.П. Ленцнер, А.А. Ленцнер // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. - 1982. - № 9. - С. 75-78.

3. Стандартизация реакции прямой гемагглютинации, вызываемой бактериями рода Lactobacillus / Е.Д. Бершадская, Н.Г. Фиш, П.П. Шевьев, В.И. Огарков / Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. - 1986. - № 8. - С. 69-71.

4. Киселев С.А. Пробиотики: новый подход к механизму терапевтического действия при лечении дисбактериоза кишечника / С.А. Киселев, Д.С. Чичерин // Клиническое питание. - 2007. - № 1-2. С. 44.

5. Микроэкология кишечника у детей и её нарушения / П.Л. Щербаков [и др.] // Фарматека. - 2007. - № 14 (148). - С. 28-34.

6. Savage D.C. Microorganisms associated with epithelial surfaces and stability of the indigenous gastrointestinal microflora / D.C. Savage // Nahrung. – 1987. – Vol. 31, № 5-6. – P. 383-95.

7. Schillinger U. In vitro adherence and other properties of lactobacilli used in probiotic yoghurt-like products / U. Schillinge, C. Guigas, W.H. Heinrich // International Dairy Journal. – 2005. – Vol. 15, № 12. – P. 1289-1297.

Сведения об авторах:

Нилова Людмила Юрьевна – кандидат медицинских наук, старший преподаватель кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии СПбГМА им. И.И. Мечникова Росздрава, тел. раб.: 8(812)543-01-95, e-mail: spbgma33@online.ru

Оришак Елена Александровна – кандидат медицинских наук, доцент кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии СПбГМА им. И.И. Мечникова Росздрава, тел. раб.: 8(812)543-01-95, e-mail: spbgma33@online.ru

Бойцов Алексей Геннадьевич – доктор медицинских наук, профессор, заведующий кафедрой микробиологии, вирусологии и иммунологии СПбГМА им. И.И. Мечникова Росздрава, тел. раб.: 8(812)543-01-95, e-mail: spbgma33@online.ru

Материал поступил в редакцию 29.06.2010 г.



Поделитесь с Вашими друзьями:
1   ...   8   9   10   11   12   13   14   15   ...   34


База данных защищена авторским правом ©dogmon.org 2017
обратиться к администрации

    Главная страница