Министерство здравоохранения и социального развития
НОВЫЕ ТЕХНОЛОГИИ, МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ, ЛЕЧЕНИЯ, ПРОФИЛАКТИКИ
Скачать 5.84 Mb.
|
5 НОВЫЕ ТЕХНОЛОГИИ, МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ, ЛЕЧЕНИЯ, ПРОФИЛАКТИКИ1213 Гонтарь+УДК 616.72-002.77-08+616.5-004.1-08+616.5-002.252.2-08 © И.П. Гонтарь, Н.В. Ненашева, Н.А. Матасова, Э.Р. Аветисова, Л.И. Кочнева, И.А. Зборовская, 2010
Государственное учреждение «Научно-исследовательский институт клинической и эксперементальной ревматологии» Российской академии медицинских наук. Россия, 400138, г. Волгоград, ул. Землячки, д. 76, тел.: 8(8442) 35-56-48, факс: 8(8442) 93-42-11. Резюме: В статье представлены результаты исследования зависимости между образованием аутоантител к компонентам соединительной ткани - эластину и эластазе, - и особенностями течения ревматических заболеваний. Ключевые слова: ревматоидный артрит; системная красная волчанка; склеродермия; антитела к эластину и эластазе; дианостическое значение. Уровень аутоантител к эластазе и эластину определяется состоянием здоровья. Так, на ограниченном количестве больных без всестороннего клинического анализа было установлено повышение содержания антител к эластину у больных системной красной волчанкой (СКВ) [5], системной склеродермией (ССД) [2], ревматоидным артритом (РА) [3], а также к эластазе - только у больных СКВ [4]. Цель исследования. Изучение корреляции между уровнями антител (АТ) к эластину и эластазе и особенностями течения заболевания в сыворотке крови больных РА, СКВ, ССД. Задачи: 1. Получить иммобилизированную форму антигена с магнитными свойствами на основе эластина и эластазы. 2. Отработать условия и технику постановки иммуноферментного анализа с использованием иммобилизированных антигенных форм. 3. Исследовать зависимость уровня специфических антител к эластазе и эластину от активности заболевания, поражений внутренних органов у больных РА, СКВ и ССД. Материал и методы исследования. Под наблюдением находились 30 практически здоровых лиц - доноров станции переливания крови МУЗ ГКБ №25 в возрасте от 26 до 60 лет (18 женщин и 12 мужчин); 106 больных с достоверным диагнозом РА, поставленным на основании критериев Американской коллегии ревматологов (ACR) (1987); 35 больных с достоверным диагнозом СКВ, поставленным на основании критериев АРА (1982), рабочей классификации клинических вариантов течения СКВ (Насонова В.А., 1972-1986), классификаций SLAM, SLEDAI, SLICC-ACR; 28 больных с достоверным диагнозом ССД, поставленным на основании критериев АРА (1980) и отечественной классификации болезни (Гусева Н.Г., 1975, с доп. 1993). Среди больных РА было 85 (80,2%) женщин и 21 (19,8%) мужчина. I степень (минимальная) активности ревматоидного процесса определена у 10 (9,4%), II (умеренная) - у 68 (64,2%) и Ш (максимальная) – у 32 (26,4%) больных. Клинико-инструментальное, иммунологическое и биохимическое обследование больных позволило выявить у 48 (45,3%) больных РА системные проявления заболевания. Наиболее часто отмечалось поражение ЦНС (церебральный васкулит) – у 30 (62,5%), анемия – у 15 (14,2%). Среди обследованных больных СКВ было 5 мужчин (14,3%) и 30 (85,7%) женщин в возрасте от 19 до 55 лет. При этом у 11,4% (4 человека) была диагностирована первая степень активности патологического процесса, у 68,6% больных (24 человека) – вторая, у 20% (7 человек) – третья. Среди больных ССД было 25 (89,3%) женщин и 3 (10,7%) мужчины. I степень активности установлена у 3 (10,7%), II – у 21 (75%), III – у 4 (14,7%) больных. АТ к эластину и эластазе определяли в сыворотке крови больных методом непрямого иммуноферментного анализа (ELISA-тест) с использованием иммобилизированных магнитосорбентов (МС) [1]. В качестве антигенов использовали коммерческие препараты компании «SIGMA-ALDRICH» (США): эластаза панкреатическая из поджелудочной железы свиньи с активностью 4 Ед/мл и эластин из легких человека. Результаты иммуноферментного определения АТ к эластазе и эластину выражали в единицах оптической плотности (е.о.п.). Положительными считались результаты, превышающие на два стандартных отклонения показатели, полученные при обследовании здоровых лиц. Статистическая обработка результатов проводилась с использованием программных пакетов «STATISTICA 6.0», «EXCEL 5.0», «SPSS 10.0». Результаты исследования и их обсуждение. Средние величины оптической плотности при определении АТ к эластазе у доноров составила 0,095 е.о.п., к эластину – 0,130 е.о.п.. Верхние границы этих значений равны соответственно 0,112 е.о.п. и 0,180 е.о.п. В дальнейшем все величины оптической плотности, превосходящие верхнее значение, считались повышенными. Изменение уровня антител к эластазе наблюдалось у 59 (55,7%), а к эластину - у 25 (23,6%) больных РА (табл. 1).
Содержание АТ к эластазе и эластину в сыворотке крови здоровых лиц и больных РА в зависимости от активности процесса
Примечание. * р<0,01; ** р<0,05. В группе больных с I активностью РА отмечалась тенденция к увеличению уровня АТ к эластазе и эластину по сравнению со здоровыми лицами. У больных со II и Ш степенью активности РА наблюдалось дальнейшее увеличение содержания АТ к эластазе и эластину по сравнению с минимальной активностью заболевания. У больных РА с системными проявлениями отмечалось увеличение содержания антител к эластазе и эластину, а у больных с суставной формой заболевания выявлялось умеренное увеличение уровня АТ как к эластазе, так и к эластину (табл. 2). Таблица 2 Уровень АТ к эластазе и эластину у больных РА в зависимости от формы заболевания
Примечание. * р<0,01; ** р<0,05. Среди больных РА с повышенными значениями АТ к эластазе (59 человек) 28 пациентов (47,5%) страдали суставной формой заболевания, а 31 (52,5%) имели и внесуставные проявления недуга. Структура висцеральных поражений выглядит следующим образом: у 16 (51,6%) больных наблюдалась анемия различной степени тяжести, у 13 (41,9%) – поражение центральной нервной системы по типу церебрального васкулита, у 5 (16,1%) – поражение сердца, у 4 (12,9%) – сосудистая патология, у 3 (9,7%) – поражение почек и у 2 (6,5%) больных выявлено поражение ретикулоэндотелиальной системы. Патологию сосудов можно объяснить содержанием в сосудистой стенке эластина, на который и образуются аутоантитела. Прямых указаний на наличие эластазы в эритроцитах нами в литературе обнаружено не было, однако, учитывая, что тромбоциты и лейкоциты, содержащие этот фермент, и эритроциты происходят от общей клетки-предшественника миелопоэза, нельзя исключить нахождение эластазы и в этих клетках крови. Повышение уровня антител к эластазе наблюдалось у 28 (80%), а повышение уровня антител к эластину - у 12 (42,9%) больных СКВ. В результате проведенной работы выявлено изолированное и сочетанное увеличение содержания АТ у больных СКВ I и II степени активности процесса, в группе больных с III степенью активности (7 человек) повышения уровня АТ к изучаемым антигенам не наблюдалось (табл. 3). Таблица 3 Уровень АТ к эластазе и эластину у больных СКВ в зависимости от активности патологического процесса
Примечание. * р<0,01; ** р<0,05. Отсутствие увеличения содержания АТ у больных с Ш степенью активности можно объяснить тем, что у наблюдаемых нами больных с максимальной активностью заболевания отсутствует поражение суставов (у 3 из 7 наблюдаются лишь артралгии), а в суставной ткани эластин представлен в большем объеме, чем в коже, которая чаще всего и повреждается при СКВ. В группе больных с повышенным уровнем АТ к эластазе (28 человек) 26 (92,9%) больных имели поражения кожи, 24 (85,7%) – суставов, 19 (67,9%) – центральной нервной системы, 13 (46,4%) – сердца, 11 (39,3%) – почек, 9 (32,1%) – мышц, 6 (21,4%) – легких, по 4 (14,3%) – поражение сосудов и ретикулоэндотелиальной системы. Среди больных ССД (группа в целом) повышение уровня антител к эластазе наблюдалось у 22 (78,6%) человек, к эластину - у 10 (35,7%), сочетанное пвышение уровня АТ к эластазе и эластину выявлено у 8 (28,6%) больных (табл. 4).
Уровень АТ к эластазе и эластину у больных ССД в зависимости от активности
Примечание. *р<0,01; ** р<0,05. При ССД с I степенью активности (3 больных), по сравнению со здоровыми, отмечается увеличение уровня антител к эластазе – у 2 (66,7%) больных, к эластину – у 1 (33,3%) больного, при средней степени активности (21 человек) соответственно - у 19 (90,5%) и у 9 (42,9%) больных. III степень активности ССД ассоциируется с увеличением в сыворотке крови больных АТ и к эластазе, и к эластину. Из 22 человек с повышенным уровнем антител к эластазе 21 (95,5%) больной имел поражение кожи, по 18 пациентов (81,8%) – сосудов и суставов, 15 (68,2%) – легких, по 12 (54,5%) – центральной нервной системы и сердца, 10 (45,5%) – мышц, у 7 человек (31,8%) наблюдалось поражение желудочно-кишечного тракта. При этом стоит отметить, что в группе больных с высоким содержанием АТ к эластазе (22 человек) выявлено более частое поражение легких (у 15 больных – 68,2%), чем в группе с низкими цифрами АТ к эластазе (из 6 человек 2 человека – 33,3%). И при ССД, и при СКВ среди больных с повышенным уровнем АТ к эластазе и эластину в структуре клинических проявлений преобладает поражение кожи. Второе место у пациентов с СКВ занимает суставной синдром, третье – васкулопатии. У больных с ССД, напротив, чаще выявляется сосудистая патология, а затем - поражение суставов. При ССД представляется важной связь повышенного уровня АТ к эластазе и эластину с поражением легких. Можно предположить, что АТ к эластазе, снижая активность фермента, могут участвовать в патологическом обмене эластина, вызывая повреждение органов дыхания. Выводы
1. Получены иммобилизированные формы эластазы и эластина, отработаны условия и техника постановки иммуноферментного анализа, изучена зависимость уровня АТ к эластазе и эластину от активности заболевания и повреждения внутренних органов у больных РА, СКВ, ССД. 2. Чаще всего у больных РА, СКВ и ССД определены: изолированное повышение содержания АТ к эластазе, немного реже - сочетанное увеличение уровня АТ и к эластазе, и к эластину, совсем единичные случаи превышения нормальных величин АТ к эластину. Возможно, это связано с тем, что аутоиммунный процесс в одном из звеньев обмена эластина начинается с образования аутоантител к эластазе. Эти аутоантитела, снижая активность эластазы, препятствуют нормальному обмену эластина, который приобретает свойства аутоантигена, провоцируя синтез АТ к нему. 3. Исследование уровня данных АТ в сыворотке крови больных РА, СКВ и ССД иммуноферментным методом с использованием иммобилизированной формы магнитоуправляемого сорбента позволит улучшить диагностику этих ревматических заболеваний, а также углубить знания о патогенезе ряда ревматических заболеваний. Список литературы 1. Гонтарь И.П. Иммобилизированные гранулированные антигенные препараты с магнитными свойствами в диагностике и лечении ревматоидного артрита, системной красной волчанки и системной склеродермии (клинико-экспериментальное исследование) // Автореф. дисс….док.м.н. – Волгоград. – 2006. – 34 с. 2. Colburn K.K. Serum anti-tropo:anti-elastin antibody ratio assessing elastin tumover in scleroderma / K.K. Colburn, G.T. Kelly, M.C. Malto // Clin Rheumatol. – 1992. - Vol. 11. - № 2. – Р. 206-210. 3. Colburn K.K. Abnormalities of serum antielastin antibodies in connective tissue diseases / K.K. Colburn, E. Langga-Shariffi, G.T. Kelly // J Investig Med. – 2003. - Vol. 51. - № 2. – Р. 104-109. 4. Dunphy J. Antineutrophil cytoplasmic antibodies and HLA class II alleles in minocycline-induced lupus-like syndrome / J. Dunphy, M. Oliver, A.L. Rands // Br. J. Dermatol. – 2000. - Vol. 142. - № 3. – Р. 461-467. 5. Gminski J. Anti-elastin antibodies in systemic lupus erythematosus / J. Gminski, W. Poborski, A. Kasprzak // Pol Tyg Lek. – 1990. - Vol. 45. - № 25-26. – Р. 513-515.
Материал поступил в редакцию 12.10.2009 г. Скачать 5.84 Mb. Поделитесь с Вашими друзьями:
|