Министерство здравоохранения и социального развития

1332 Чупров+

© И.Н. Чупров, С.В. Ключарева, В.Л. Романова, 2010

Резюме: Было изучено состояние базальной мембраны опухолевой паренхимы при различных вариантах базально-клеточного рака кожи с использованием иммуногистохимических реакций с антителами к коллагену IV типа и белку межклеточной адгезии Е-кадгерину. Наиболее выраженные повреждения базальной мембраны, явившиеся морфологическими маркерами агрессивного биологического поведения, были отмечены в инфильтративном базально-клеточном раке кожи.

Ключевые слова: базально-клеточный рак; кожа; базальная мембрана; иммуногистохимия.
Базально-клеточный рак кожи (БКРК), являясь одним из самых частых новообразований, характеризуется широким спектром биологического поведения – от существующих годами и десятилетиями неинвазивных форм, до агрессивных вариантов с глубоким местным деструирующим ростом [2, 3, 5, 6]. В связи с этим необходим поиск морфологических маркеров, позволяющих улучшить диагностику БКРК.

Росту БКРК предшествуют количественные и качественные изменения базальной мембраны (БМ) эпидермиса [7]. Зона базальной мембраны состоит из множества молекулярных компонентов. Изменения базальной мембраны в БКРК, оцененные с помощью антител к ламинину и коллагену IV типа, в той или иной степени имеются в каждом БКРК и заключаются в разрывах, нарушении целостности, расщеплении мембраны. Особенно выражены эти изменения были в инвазивных формах – микронодулярной, инфильтративной, фиброзирующейся [11].

Различные α-цепи коллагена IV типа по-разному экспрессируются в некоторых вариантах БКРК. В нодулярном БКРК отмечается снижение экспрессии α1-цепи, в инфильтративном − α5-цепи [13]. В инфильтративном БКРК отмечено снижение уровня экспрессии компонентов базальной мембраны – эпилигрина и интегрина (цепи α6, β4), коллагена IV типа, что может способствовать инвазии опухоли [8].

Инфильтративный тип роста характеризуется большей выраженностью дегенеративных изменений базальной мембраны, указывающих на высокую агрессивность этого варианта [4]. Участвующие в процессе межклеточной адгезии E- и Т-кадгерин, кальций-независимая система из нектина и афадина, относящаяся к суперсемейству иммуноглобулинов [1], характеризовались пониженной экспрессией в БКРК, отражая его инвазивные потенции [14, 15].

В инфильтративном БКРК при резком снижении уровня E-кадгерина (эпителиального) наблюдался стабильно высокий уровень P-кадгерина (плацентарного), что позволило сделать вывод о разном значении этих видов кадгерина в морфогенезе БКРК [10].

Цель исследования. Сравнительное иммуногистохимическое изучение базальной мембраны паренхимы в различных вариантах базально-клеточного рака кожи с выявлением критериев индивидуального прогноза.

Материал и методы исследования. Из имевшегося в нашем распоряжении 2031 случая БКРК были отобраны разные группы опухолей в соответствии с рубрикацией, приведенной в классификации опухолей кожи Всемирной Организации Здравоохранения (ВОЗ) 2006 года.

Иммуногистохимическая реакция проводилась в 47 случаях БКРК с различными гистотопографическими типами роста (поверхностных – 4, крупнонодулярных – 20, мелконодулярных – 13, инфильтративных – 10) с использованием первичных моноклональных антител к Е-кадгерину («Novocastra», Великобритания) и коллагену IV типа («Dako», Дания). В качестве вторых антител использовали биотинилированные анти-мышиные и анти-кроличьи иммуноглобулины из универсального набора. Визуализацию окрасок проводили с применением комплекса авидина с биотинилированной пероксидазой (ABC-kit), с последующим проявлением пероксидазы хрена диаминобензидином. Были поставлены положительные и отрицательные контроли. Для фонового окрашивания использовался гематоксилин.

Оценка уровня экспрессии пролиферативных маркеров Е-кадгерина проводилась в процентах окрашенных ядер в гнездах опухолевых клеток. Оценка экспрессии коллагена IV типа в базальной мембране опухолевых комплексов осуществлялась морфометрическим методом и подсчитывалась в процентном отношении к площади базальной мембраны.

Количественная оценка результатов исследования проводилась с использованием системы компьютерного анализа микроскопических изображений, состоящей из микроскопа Nikon Eclipse E400, цифровой камеры Nikon DXM1200, персонального компьютера на базе Intel Pentium 4, программного обеспечения «АСТ-1» (версия 2.12) и компьютерной программы «Видеотест-Морфология» (версия 5.0).

Статистическую обработку данных проводили на компьютере IBM PC с процессором Intel Celeron 3,2 ГГЦ с применением методов вариационной статистики программы Microsoft Excel XP. Для сопоставления морфологических характеристик и клинических данных в разных группах были использованы непараметрические статистические методы, включающие точный критерий Фишера, классический критерий χ² по Пирсону, U-критерий Манна-Уитни и метод Краскела-Уоллиса. Значимость различий между отдельными группами считали статистически достоверной при значении «p» не более 0,05.

Результаты исследования и их обсуждение. Изменения базальной мембраны, оцененные с помощью антител к коллагену IV типа, в той или иной степени имелись в каждом случае БКРК. Состояние базальной мембраны оценивалось как целостное, имеющее разрывы, отсутствующее. В поверхностном БКРК целостность базальной мембраны была сохранена. Базальная мембрана имела разрывы или полностью отсутствовала при крупнонодулярном и мелконодулярном БКРК в объеме 11,3±1,5% и 18,7±2,7% от площади всей базальной мембраны соответственно. Максимально повреждена базальная мембрана была в инфильтративном БКРК, в объеме 43,2±5,8% от всей ее площади, причем отсутствие базальной мембраны встречалось даже чаще, чем нарушение ее целостности.

Такие нарушения в строении базальной мембраны сочетались с отсутствием палисадообразных базалоидных структур по периферии гнезд опухолевых клеток, характерных для других вариантов БКРК.

Экспрессия E-кадгерина отличалась различной выраженностью в разных гистотопографических типах роста БКРК. В поверхностном БКРК максимальная интенсивность реакции была характерна для периферических участков опухолевых гнезд в базалоидных «частоколах», встречаясь в 73,1±6,7% опухолевых клеток. Как правило, положительно окрашивались мембраны клеток. В крупнонодулярном и мелконодулярном БКРК экспрессия Е-кадгерина была менее выражена – 51,2±4,2% и 41,3±3,4% клеток соответственно. Окрашивались опухолевые клетки как по периферии опухолевого пласта, так и в центре. Реакция носила смешанный мембранно-цитоплазматический характер. Минимальная экспрессия Е-кадгерина отмечалась в инфильтративном БКРК с преимущественным цитоплазматическим типом окрашивания в 29,1±1,9% опухолевых клеток. Показатели нарушения целостности базальной мембраны при разных вариантах БКРК представлены в табл. 1.

Экспрессия паренхимой E-кадгерина, % позитивных клеток (M±m) и частота нарушения БМ (коллаген IV), % от площади базальной мембраны (M±m)

Таким образом, в инфильтративном БКРК имелось статистически значимое преобладание мембранных изменений, оцененных по экспрессии коллагена IV типа (p=0,028) и нарушения межклеточных связей со снижением экспрессии адгезивных молекул (Е-кадгерин), p=0,013. По своим характеристикам мелконодулярный БКРК занимает промежуточную позицию между крупнонодулярным и инфильтративным БКРК.

При изучении экспрессии коллагена IV типа нами подтверждена тенденция к нарастанию нарушений базальной мембраны при реализации инвазивных потенций [8, 12, 13]. Кроме того, установлено, что нарушение базальной мембраны имеет не только количественный, но и качественный характер: снижение экспрессии коллагена IV типа сочетается с разрывами и отсутствием базальной мембраны, особенно в зонах глубокого инвазивного роста инфильтративного БКРК.

Нарастание агрессивности опухолевого роста с максимальной выраженностью характерно для инфильтративного БКРК и коррелирует с зонами нарушения межклеточных связей со снижением экспрессии адгезивных молекул Е-кадгерина. Аналогичные данные имеются в литературе [9, 10]. Кроме количественного снижения экспрессии, в работе установлено смещение акцента интенсивности реакции с клеточных мембран на цитоплазму.

Заключение. Для разных гистотопографических типов роста базально-клеточного рака кожи характерны различные изменения базальной мембраны паренхиматозных структур по показателю экспрессии антител к коллагену IV типа, заключающиеся в сохранности базальной мембраны при поверхностном типе роста, разрывах и отсутствии в крупно- и мелконодулярном вариантах, максимальном ее повреждении при инфильтративной форме. Эти показатели коррелируют с мембранной экспрессией маркера межклеточной адгезии Е-кадгерина: максимальной - в поверхностном базально-клеточном раке, сниженной − в крупно- и мелконодулярном, минимальной - в инфильтративном варианте.

Список литературы

1. Аничков Н.М. Биология опухолевого роста (молекулярно-медицинские аспекты) / Н.М. Аничков, И.М. Кветной, С.С. Коновалов. – СПб.: Прайм-ЕВРОЗНАК, 2004. – 224 с.

2. Дерматоонкология / под ред. Г.А. Галил-Оглы, В.А. Молочкова, Ю.В. Сергеева. − М.: Медицина для всех, 2005. − 872 с.

3. Дубенский В.В. Современные аспекты эпидемиологии, патогенеза, клиники и лечения базально-клеточного рака кожи / В.В. Дубенский, А.А. Гармонов // Вестник дерматологии и венерологии. − 2004. − № 6. − С. 7−12.

4. Особенности инвазии базально-клеточного рака / Н.Г. Дойкова [и др.] // Архив патологии. − 2000. − № 3. − С. 29−33.

5. Снарская Е.С. Базалиома / Е.С. Снарская, В.А. Молочков. − М.: Медицина, 2003. − 324 с.

6. Хлебникова А.Н. Клинико-морфологические и иммуногистохимические особенности различных форм базальноклеточного рака кожи и комплексный метод его лечения : автореф. дис. …д-ра мед. наук : 14.00.11, 14.00.15 / А.Н. Хлебникова. – М., 2007. – 37 с.

7. Bedeutung der Basalmembran fur das Wachstum von Tumoren – Immunhistochemische Aspekte unter besonderer Berucksichtigung von Tumoren des Kopf / A. Nerlich [et al.] // Laryngorhinootologie. − 1994. − № 12. − P. 631−636.

8. Evaluation of basement membrane status in aggressive skin carcinomas with skull base invasion: a case-control study / C.R. Cernea [et al.] // Ann Diagn Pathol. − 2005. − № 3. − P. 130−133.

9. Expression of beta-catenin in basal cell carcinoma / M. El-Bahrawy [et al.] // Br J Dermatol. − 2003. − № 5. − P. 964−970.

10. Expression of desmoglein I and plakoglobin in skin carcinomas / H. Tada [et al.] // J Cutan Pathol. − 2000. − № 1. − P. 24−29.

11. Kirihara Y. Clinicopathological and immunohistochemical study of basal cell carcinoma with reference to the features of basement membrane / Y. Kirihara, J. Haratake, A. Horie // J Dermatol. − 1992. − № 3. − P. 161−169.

12. Panuncio A. Immunohistochemical study of nerve fibres in basal cell carcinoma / A. Panuncio, R. Vignale, G. Lopez // Eur J Dermatol. − 2003. − № 3. − P. 250−253.

13. Quatresooz P. Differential expression of alpha1 (IV) and alpha-5 (IV) collagen chains in basal-cell carcinoma / P. Quatresooz, O. Martalo, G.E. Pierard // J Cutan Pathol. − 2003. − № 9. − P. 548−552.

14. Takeuchi T. Downregulation of expression of a novel cadherin molecule, T-cadherin, in basal cell carcinoma of the skin / T. Takeuchi, S.B. Liang, Y. Ohtsuki // Mol Carcinog. − 2002. − № 4. − P. 173−179.

15. The expression of nectin-1alpha in normal human skin and various skin tumours / H. Matsushima [et al.] // Br J Dermatol. − 2003. − № 4. − P. 755−762.

Сведения об авторах:

Чупров Игорь Николаевич – кандидат медицинских наук, доцент кафедры дерматовенерологии Санкт-Петербургской медицинской академии последипломного образования. Тел.: 8(921)387-03-78, e-mail: igorchuprov@gmail.com

Ключарева Светлана Викторовна – доктор медицинских наук, профессор кафедры дерматовенерологии Санкт-Петербургской государственной медицинской академии им. И.И. Мечникова. Тел.: 8(921)747-30-85. E-mail: genasveta@rambler.ru

Романова Виктория Леонидовна - аспирант кафедры дерматовенерологии Санкт-Петербургской государственной медицинской академии им. И.И. Мечникова. Тел.: 8(921)747-30-85. E-mail: genasveta@rambler.ru

Материал поступил в редакцию 10.06.2010 г.